退火温度设计为什么和引物有关

退火温度是影响PCR反应特异性的重要因素.引物与模板复性所需要的退火温度取决于引物的度、碱基组成及其浓度.引物度越短，引物中G+C的含量越低，所需的退火温度越低.虽然降低退火温度可能增加扩增产量，但引物退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm 值为参考，一般比Tm 低5 2）设计简并引物，以cDNA 为模板，PCR 后胶回收连接转化测3′RACE 利用

退火指的是是在高温下分开的DNA的两条单链，在减低温度后重新结合成为双链的过程. 退火温度与时间，取决于引物的度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的度.对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃为选择最适退火温度的起点较为理想.引物与模板复性所需要的退火温度取决于引物的度、碱基组成及其浓度。引物度越短，引物中G+C的含量越低，所需的退火温度越低。虽然降低退火温度可

引物度的上限并不很重要，主要与反应效率有关。由于熵的原因，引物越这样使另外一个引物的设计变得十分困难，因为一对引物间退火温度相差不宜