退火温度不能大于引物Tm值吗

当然不能用Tm值来作为退火的温度.一般来说，退火温度比Tm值要低上5度左右.但是这个也不是绝对的.建议你如果说模板比较充足的话，做一个梯度试验.范围在Tm值周解析看不退火温度一般设定比引物的Tm低5℃。④引物退火温度退火温度决定PCR特异性与产量；温度高特异性强，但过高则引物不能与模板牢固结合，DNA扩增效率

退火温度与引物的TM值的关系主要和DNA聚合酶与其buffer有关。有些退火温度要比TM低5度、3度，有些还会高3度，有些是一模一样的。主要参考不同公司所合适的退火温度应低于引物Tm值5℃左右B. 引物与模板的退火温度一般在45-55℃之间C. 在Tm值允许的范围内，选择偏低的退火温度可以提高PCR反应的特异性D. 退火时间至少需要一分钟参考答： 参考答为D