tm值与退火温度对照表

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• pcr退火温度一般为多少？
• 知道引物如何求退火温度和循环次数
• PCR中Tm值如何计算?

pcr退火温度一般为多少？一般退火温度为55℃至60℃，有些材料甚至高达70℃。 退火温度一般设置为比引物的Tm低5℃。 一旦Tm值确定，Tm值（熔化温度）=4（G+C）+2（A+）一般也就确定了T）。 从这个范围来看，上面的两个DE选项都是可能的，这个问题太笼统了。

知道引物如何求退火温度和循环次数Tm值计算公式：
20bp及以下引物，Tm=4℃(G+C)+2℃(A+T)
20bp及以上引物，Tm=0.41(%ofGC))+81.5-675/尺寸（尺寸=引物度）。
进行PCR反应时，退火温度一般比Tm值低5°左右。
循环次数一般为30次。

PCR中Tm值如何计算?引物设计软件可以提供引物所用缓冲液的Tm、引物度、碱基组成和离子强度等数据。
对于度小于25mer的引物，Tm计算公式为：Tm=4℃(G+C)+2℃(A+T)
对于较的寡核苷酸，Tm计算公式：
Tm=81.5+16.6xLog10[Na+]+0.41(%GC)–600/size
B公式Size=引物度。